注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

人白介素3(IL-3)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素2受體(IL-2R)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ )ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素29(IL-29)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素28A（IL-28A）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素27(IL-27)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素26（IL-26）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素24（IL-24）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素23(IL-23)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素22（IL-22）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素21（IL-21）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素2(IL-2)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

東方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人preptin 96THuman preptin ELISA Kit

人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉 96TDPD(Human deoxypyridinoline) ELISA Kit

人抑肽酶 96TAP(Human Aprotinin) ELISA Kit

人核糖核酸酶 96TRNASE(Human Ribonuclease) ELISA Kit

人糖原合成酶激酶 96TGSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit

人β2微球蛋白 96TBMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit

人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因 96THuman similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA Kit

人苯丙氨酸 96TLPA(Human L-phenylalanine) ELISA Kit

人抗弓形體IgM抗體 96Tanti-tox IgM(Human anti-toxoplasma IgG antibody) ELISA Kit

人血小板相關(guān)補(bǔ)體3 96TPAC3(Human platelet-associated Complement 3) ELISA Kit

人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物 96THuman plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit

人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素 96Thuman corticotropin releasing hormone,CRH ELISA Kit

人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43 96THuman growth-associated protein 43,GAP-43 ELISA Kit

封閉用正常小鼠血清（原液） 5mlmouse serum

總RNA提取試劑 20mlTRIquick

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。